必ず、事前に担当職員に予約の上サンプルを持ち込んで下さい。サンプルの状態は、
液クロ等で分取した溶液サンプル、電気泳動後PVDF膜にブロッティングしたものどち
らでも結構です。分析は一日一本のみです。
使用料金 3,000円/検体
2,200円/残基数
詳細は第三分室 田丸(内7472)まで
試料の調整および溶媒について
〈溶液サンプル〉
イオン交換クロマトやゲル濾過などで精製した蛋白質は、塩類や不揮発性
物質などを除去した後、凍結乾燥させ下記の好ましい溶媒に溶解しサンプル
とする。脱塩は、逆相カラムを用いたHPLCなどにより行うことが多い。
共同実験室で依頼を受けるのは、ほとんどTFA-アセトニトリルを用いた逆相
クロマトにより分取したサンプルをそのまま、あるいは濃縮してサンプルと
したものです。
・好ましい溶媒
酢酸、0.1%TFA、アセトニトリル、ギ酸、メタノ−ル、エタノ−ル
トリメチルアミン、トリエチルアミン、プロパノール、D.W.、0.1%SDSなど
・好ましくない溶媒
リン酸塩、トリス、グリシン、アンモニア、アンモニウム塩、アンフォライト
グリセロ−ル、ショ糖、非イオン性界面活性剤、大量のSDS、
大量の酸やアルカリなど
〈ブロッティングサンプル〉
蛋白質をゲル電気泳動で分離し、ブロッティング装置を用いてPVDF膜に電気
泳動的にブロットしサンプルとする。現在依頼される8割はブロッティングサン
プルです。(ニトロセルロース膜は使用できません。)
《使用分析機器》
パーキンエルマー Model 491-01 (PERKIN ELMER Procise Model 491-01) 平成8年3月購入 反応方法 :パルスリキッドフェーズ・ガスフェーズ サイクルタイム:20分 分析感度 :10pmol,20残基(β-ラクトグロブリン) 分析時間 :4時間40分(10残基),8時間10分(20残基) |