373S ゲル溶液調整法
1.ビーカーにUrea, Stock溶液※, dH2Oを入れ、穏やかに加熱しながらスターラで攪拌します。
2. Ureaが溶解したら10x TBEを加え、Total volumeまでdH2Oでメスアップします。
3. 0.2umのフィルターでゲル溶液をろ過し、数分間脱気します。
4. APS, TEMEDを加え、組み立てたガラス板に流し込みます。
5.ゲルは、作ってから2〜6時間の間に使用するようにします。
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34cm WTR |
48cm WTR |
スキャン方式 |
Full Scan |
Base Sprinter |
Full Scan |
ゲル種類 |
Acrylamide*1 |
Super Soln.*2 |
Acrylamide*1 |
Super Soln.*2 |
Acrylamide*1 |
Super Soln.*2 |
ゲル濃度 |
4.75% |
6.75% |
4.25% |
5.50% |
4.00% |
5.00% |
Urea |
25.0g |
25.0g |
25.0g |
25.0g |
30.0g |
30.0g |
stock溶液* |
5.9mL |
6.75mL |
5.3mL |
5.5mL |
6.0mL |
6.3mL |
dH2O |
(18mL) |
(17mL) |
(15mL) |
(15mL) |
(22mL) |
(22mL) |
10x TBE |
5.0mL |
5.0mL |
5.0mL |
5.0mL |
6.0mL |
6.0mL |
Total volume |
50mL |
50mL |
50mL |
50mL |
60mL |
60mL |
メスアップします |
10% APS |
250uL |
250uL |
250uL |
250uL |
300uL |
300uL |
TEMED |
25uL |
25uL |
25uL |
25uL |
30uL |
30uL |
373
の
設定 |
Watts |
32W |
40W |
45W |
45W |
40W |
40W |
Volts |
2500V |
2500V |
2500V |
2500V |
2800V |
2800V |
Hr |
14~16hr |
14~16hr |
8~10hr |
8~10hr |
17~18hr |
17~18hr |
Mac
の
設定 |
Mobility File |
DP6% Ac {xx}
DT6% Ac {xx} |
DP4% Ac {xx}
DT4% Ac {xx} |
DP4% Ac {xx}
DT4% Ac {xx} |
Base Caller |
1st |
ABI 50 |
ABI 50 |
ABI 50 |
2nd |
Semi Adaptive |
Semi Adaptive |
Semi Adaptive |
3rd |
Adaptive |
Adaptive |
Adaptive |
※Stock溶液
*1:Acrylamide ・・・40% Acrylamide/bis Stock
*2:Super Soln.・・・50% Super Reading DNA Sequence Solution(東洋紡)
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